細胞牽張培養(yǎng)結合熒光染色技術

細胞機械刺激培養(yǎng)后的熒光染色

活細胞中水的比例高，其結構通常是透明的。研究者通過使用不同染色劑可以優(yōu)先染色某些部分，或觀察細胞內的某些結構。例如細胞核、細胞壁，或整個細胞。

幾乎所有機械傳導研究的驅動目標都是細胞對機械刺激的生化反應。因其往往伴隨著細胞骨架和形態(tài)的變化，有效使用細胞熒光染色技術可以對細胞信號進行重要的定性和定量觀察。

然而，體外牽張培養(yǎng)使用的PDMS柔性基底膜可能會帶來新的挑戰(zhàn)，特別是與通常使用的培養(yǎng)皿或玻片相比。

拉伸膜是否會降解

使用丙酮或氯仿，腔室的硅樹脂膜可能會略微膨脹；甲醇則沒有問題，可以觀察到將細胞平面?zhèn)确旁谏w玻片上的良好圖像。

取材

待細胞拉伸結束，可使用手術刀或類似工具切下一塊PDMS，保持包被涂層和細胞仍在其上。建議將膜切成矩形，以識別拉伸方向，避免用標簽等損害樣品質量。

準備好膜后，將其細胞面朝下放置在載玻片上，并使用封裝介質，如PermaFluor™封片劑。

熒光染色步驟

滲透：通常使用溫和的表面活性劑溶解細胞膜，以允許較大的染料分子進入細胞內部。

固定：用于在制備過程中保存細胞或組織形態(tài)。大多數固定程序都需要添加化學固定劑，可以在蛋白質之間形成化學鍵，以增加蛋白質的剛性。常見的固定劑包括甲醛、乙醇、甲醇等。

安裝：將樣品附著到載玻片上進行觀察和分析。細胞可以直接生長到載玻片上，也可以使用無菌技術將松散細胞轉移到載玻片。組織材料的切片也可以應用于顯微鏡載玻片以進行觀察。

染色：對樣本進行染色，以使細胞、組織、成分或代謝過程著色。該過程可能涉及將樣品浸入染料溶液中，然后沖洗并在顯微鏡下觀察樣品。有些染料需要使用媒染劑——與染料反應形成不溶性有色沉淀的化學化合物。當過量的染料溶液被洗掉時，媒染的印記會留在樣品上。